Jump to content
Forum Kopalni Wiedzy

Recommended Posts

Od jakiegoś czasu poszukuje się związków chemicznych wspomagających obrazowanie, które sprawdziłyby się w ramach monitoringu pacjentów zażywających heparynę, czyli lek zapobiegający krzepnięciu krwi. Wg Włochów, do tego celu świetnie nadaje się lucyferaza - enzym odpowiadający za świecenie robaczków świętojańskich (Bioconjugate Chemistry).

Zespół Bruce'a Branchiniego wskazywał na potrzebę wynalezienia takich związków wspomagających obrazowanie, które emitowałyby promieniowanie w bliskiej podczerwieni. Głębiej penetruje ono tkankę, pozwalając lekarzom wykryć białka zaangażowane w krzepnięcie.

Podczas testów naukowcy połączyli proteinę pozyskiwaną z lucyferazy świetlików z gatunku Photinis pyralis ze specjalnym fluorescencyjnym barwnikiem. Umożliwia on białku emitowanie promieniowania w bliskiej podczerwieni. Okazało się, że pozwala to wykryć niewielkie ilości aktywnego czynnika X (Xa). Inhibitory tego związku wykorzystuje się w zapobieganiu zdarzeniom zakrzepowo-zatorowym. Czynnik Xa bierze udział m.in. w aktywacji VIII czynnika krzepnięcia.

Bioluminescencja i rezonansowe przeniesienie energii wzbudzenia bioluminescencji (ang. bioluminescence resonance energy transfer, BRET) to dwa naturalnie występujące zjawiska emisji promieniowania, które wykorzystano do różnych celów, np. obrazowania in vivo. Kluczowym elementem takich aplikacji jest lucyferaza, dająca żółtozielone światło. Opisywane technologie można ulepszyć, bazując na potencjale promienowania w bliskiej podczerwieni (nIR). Włosi zademonstrowali, że da się uzyskać emisję spektralną z maksimami 705 i 783 nm, wiążąc kowalencyjnie wariant lucyferazy z fluorescencyjnym barwnikami nIR.

Akademicy zwracają uwagę na znaczenie wybiórczego znakowania fluorescencyjnymi barwnikami i skuteczność zapewnianą przez proces międzycząsteczkowego BRET. Włochom udało się też skonstruować wspomniane już wcześniej biotynylowane (oznakowane) białko fuzujące, czyli zlewające się, które emitowało promieniowanie w podczerwieni. Nowy materiał unieruchomiono na podłożu/macierzy zawierającej streptoawidynę - stosowaną w biotechnologii do oczyszczania białek - pokazując, że rozwiązanie można by uwzględnić w obrazowaniu z wykorzystaniem receptorów. To samo białko zastosowano do określenia aktywności czynnika Xa przy fizjologicznych stężeniach we krwi.

W badanym układzie emisja w podczerwieni była możliwa tylko w sytuacji, kiedy cząsteczka lucyferazy była ściśle powiązana z barwnikiem fluorescencyjnym. Autorzy studium wykorzystali to zjawisko i połączyli obie te molekuły za pomocą krótkiego łańcucha aminokwasowego podatnego na trawienie przez czynnik Xa. W tej sytuacji aktywacja czynnika X powodowała nie tylko powstawanie skrzepu, ale też rozpad kompleksu lucyferazy z fluorochromem i tym samym spadek emisji nIR w próbce. Dokładny pomiar tempa tego zaniku pozwolił tym samym na ustalenie aktywności enzymatycznej czynnika Xa.

Share this post


Link to post
Share on other sites

Czytam, ale nie rozumiem. W taki sposób ten kompleks lucyferazy i barwnika łączy się z aktywowanym czynnikiem X? Czy w kompleksie nie ma przypadkiem np. jeszcze jakiegoś przeciwciała?

Share this post


Link to post
Share on other sites

Czytam, ale nie rozumiem. W taki sposób ten kompleks lucyferazy i barwnika łączy się z aktywowanym czynnikiem X? Czy w kompleksie nie ma przypadkiem np. jeszcze jakiegoś przeciwciała?

Przeciwciała nie ma, ale poczytałam w źródle i udało mi się doszukać, że w grę wchodzi podłoże z streptoawidyną.

Share this post


Link to post
Share on other sites

Skoro streptawidyna, to i biotyna musiała być w to zamieszana (pewnie w formie biotynylowanego białka), bo te dwa związki są praktycznie zawsze wykorzystywane razem. Dzięki za info ;)

Share this post


Link to post
Share on other sites

Barwniki fluorescencyjne z ekscytacją w widmie UV są stosowane od dawna, więc niczego nowego nie odkryłeś (przy czym zapewniam, że istnieją znacznie skuteczniejsze od chininy).

 

Problem w tym, że w tym konkretnym zastosowaniu zastosowano swoisty pomiar aktywności enzymu - zwykłe oświetlanie próbki UV i zastosowanie chininy w tej aplikacji zupełnie nic by nie dało.

Share this post


Link to post
Share on other sites

Chinina leczy malarię i jest w dobrych tonikach , ludzki organizm wręcz jej potrzebuje. Skupiając się na badaniach z jej wykorzystaniem mozna leczyć ale i analizować całe populacje to daje konkretny efekt a czasu mało.

Share this post


Link to post
Share on other sites

...czyli kolejna porcja bzdur oderwanych od tematu.

 

Skoro benzyna jest dobra dla samochodów, to może pij ją zamiast herbaty? Byłoby to równie logiczne, jak wykorzystanie chininy do badania kaskady krzepnięcia, skoro leczy malarię.

Share this post


Link to post
Share on other sites

To już się robi nudne, jak podwijasz znowu ogon zamiast przyznać się jak facet do błędu, tchórzu.

Share this post


Link to post
Share on other sites

Join the conversation

You can post now and register later. If you have an account, sign in now to post with your account.
Note: Your post will require moderator approval before it will be visible.

Guest
Reply to this topic...

×   Pasted as rich text.   Paste as plain text instead

  Only 75 emoji are allowed.

×   Your link has been automatically embedded.   Display as a link instead

×   Your previous content has been restored.   Clear editor

×   You cannot paste images directly. Upload or insert images from URL.

Sign in to follow this  

×
×
  • Create New...